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核酸染料是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中不可或缺的試劑,其中溴化乙錠(EtBr)因其高靈敏度,長(zhǎng)期以來一直被用作核酸染色的標(biāo)準(zhǔn)染料。但是EtBr具有潛在的誘變和致癌作用,EtBr能與DNA嵌合,引起細(xì)胞突變,長(zhǎng)期接觸可能對(duì)人體健康產(chǎn)生負(fù)面影響。NIPPON GENETICS推出的新型MIDORIGreen系列核酸染料,是一種非致癌性和非致突變性的染料,無法穿透乳膠手套和細(xì)胞膜。同時(shí)致突變性試驗(yàn)(Ames試驗(yàn))和細(xì)胞毒性試驗(yàn)均為陰性,因此是一種高安全度的核酸染料[1]。
紫外光與EtBr染色至今仍一起被用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中檢測(cè)核酸。然而紫外光譜會(huì)導(dǎo)致DNA樣品的修飾和降解,30秒的紫外線曝光足以大幅降低克隆效率。藍(lán)/綠LED在470 nm - 520 nm處發(fā)出安全可見光,這種光譜對(duì) DNA 沒有破壞性,與紫外光相比,DNA完整性和克隆/測(cè)序效率完全不受影響,即使在長(zhǎng)時(shí)間的光照下也是如此。MIDORIGreen系列核酸染料經(jīng)過優(yōu)化,可在紫外光或藍(lán)/綠光激發(fā)時(shí)獲得更亮的信號(hào),同時(shí)也兼容紫外光。
圖1:EtBr和MIDORIGreen吸收光譜對(duì)比
MIDORIGreen產(chǎn)品特點(diǎn)
? 出色的信號(hào)質(zhì)量
? 用于凝膠內(nèi)染色和后染色的安全核酸染料
? 溴化乙錠的安全替代品:非致癌無毒
? 適用dsDNA、ssDNA或RNA染色
? 膠染法和泡染法均可
MIDORIGreen Advance
MIDORIGreen Advance靈敏度與EtBr相當(dāng),可以直接添加到熔融的瓊脂糖中。同時(shí)兼容紫外線或藍(lán)/綠LED,因此無需更改原有的實(shí)驗(yàn)步驟。MIDORIGreen Advance的稀釋倍數(shù)可高達(dá)1:25000。100 mL瓊脂糖凝膠只需4μL至6μL,每1mL的染料可配置約17L至25L瓊脂糖凝膠。
MIDORIGreen Direct
MIDORIGreen Direct中已經(jīng)包含10X Loading Buffer,可以直接添加到核酸樣品中,無需將其或任何其他染料添加到凝膠基質(zhì)。相較于在凝膠中添加染料的染色方式,核酸的直接染色消除了背景染色,提供了完美的信噪比。1 mL的 MIDORIGreen Direct足夠提供1,000至2,000個(gè)樣品的染色。
MIDORIGreen Direct可以為下游提供更好的結(jié)果。
從瓊脂糖凝膠中分離核酸可以進(jìn)一步下游應(yīng)用,許多染料,如EtBr甚至SYBR? Green,由于其嵌入特性,都是強(qiáng)酶抑制劑。而MIDORI Green 染料與 DNA 骨架結(jié)合的方式能為下游應(yīng)用帶來更高的效率,包括克隆、測(cè)序、PCR等。[2]
MIDORIGreen Xtra是NIPPON GENETIC最新一代核酸染料,針對(duì)藍(lán)/綠LED和藍(lán)LED光源進(jìn)行了優(yōu)化,可以在瓊脂糖凝膠中產(chǎn)生強(qiáng)熒光信號(hào)。同時(shí)MIDORIGreen Xtra不會(huì)對(duì)瓊脂糖凝膠進(jìn)行染色,因而具有很低的背景噪音,從而獲得出色的信噪比。由于非常低的背景熒光,這使得識(shí)別少量 DNA 變得非常容易,因此MIDORIGreen Xtra具有超高靈敏度。
圖3:使用MIDORI Green Xtra檢測(cè)的DNA條帶具有超高靈敏度(注:左圖使用藍(lán)色/綠色 LED 透射儀進(jìn)行檢測(cè);右圖使用藍(lán)色LED透射儀進(jìn)行檢測(cè)。)
MIDORIGreen easy
MIDORIGreen easy具有與MIDORIGreen Xtra相同的出色信號(hào)質(zhì)量和低背景,擁有比EtBr更好的信號(hào),MIDORIGreen easy的開發(fā)是為了可以輕松替換SYBR®safe,同時(shí)染色方案不需要改變。MIDORIGreen Easy的稀釋倍數(shù)可高達(dá)1:10000,100 mL瓊脂糖凝膠只需8μL至10μL。
圖4:MIDORIGreen easy(左)與MIDORIGreen Xtra(右)使用藍(lán)/綠 LED 激發(fā)燈。
MIDORIGreen系列檢測(cè)光譜與靈敏度
產(chǎn)品 |
藍(lán)/綠LED |
藍(lán)LED |
UV-Light |
靈敏度 |
MIDORIGreen Advance |
√ |
√ |
? |
+ |
MIDORIGreen Direct |
√ |
√ |
? |
+ + |
MIDORIGreen Xtra |
√ |
√ |
? |
+ + + |
MIDORIGreen Easy |
√ |
√ |
√ |
+ + |
注: √表示兼容;?表示兼容但不推薦;
MIDORIGreen核酸染料系列產(chǎn)品列表
貨號(hào) |
品名 |
規(guī)格 |
MG04 |
MIDORIGreen Advance |
|
MG06 |
MIDORIGreen Direct (含loading buffer) |
1 ml (10x conc. -可直接添加樣品) |
MG10 |
MIDORIGreen Xtra |
1 ml (25.000x -可染色25L凝膠) |
MG12 |
MIDORIGreen Easy |
0.4 ml (10.000x -可染色4L凝膠) |
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