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支原體污染解決方案, 給細(xì)胞更多的安全與保護(hù)

什么是支原體?

 

支原體是一種大小介于細(xì)菌和病毒之間(最小直徑 0.2μm)并獨(dú)立生活的微生物,沒(méi)有細(xì)胞壁,表面由胞質(zhì)膜構(gòu)成,約有 1%的支原體可通過(guò)濾菌器。支原體污染細(xì)胞后,培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁,多數(shù)情況下細(xì)胞病理變化輕微或不顯著。細(xì)微變化也可由于傳代、換液而緩解,因此易被忽視。但個(gè)別嚴(yán)重者,可致細(xì)胞增殖緩慢,甚至從培養(yǎng)器皿脫落。支原體污染細(xì)胞后會(huì)影響下游試驗(yàn)結(jié)果。

 

 

為什么要重視細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染?

 

1、污染率高:在細(xì)胞研究領(lǐng)域,支原體是臭名昭著的污染源,二十世紀(jì)九十年代的支原體污染率是四分之一,而目前有仍然有超過(guò)十分之一的基因表達(dá)研究(許多曾發(fā)表在頂尖雜志上),表現(xiàn)出支原體污染的跡象;

 

2、影響日趨嚴(yán)重:雖然支原體污染并不一定意味著研究結(jié)果無(wú)效,但它會(huì)影響數(shù)百個(gè)基因的表達(dá),并與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)阻礙細(xì)胞的生長(zhǎng)。在目前測(cè)試的一組受污染的數(shù)據(jù)中(淋巴瘤細(xì)胞),已經(jīng)鑒定出 61 個(gè)被支原體改變的基因,干擾了實(shí)驗(yàn)結(jié)果。這無(wú)疑是對(duì)時(shí)間,資源,經(jīng)費(fèi)很大的浪費(fèi);

 

3、難察覺(jué):支原體污染完全是不留痕跡的,污染后的細(xì)胞生長(zhǎng)速率一般并未發(fā)生顯著的影響,無(wú)法用肉眼識(shí)別,除非采用專(zhuān)門(mén)的支原體檢測(cè)方法檢測(cè);

 

4、污染源多:草率操作、細(xì)胞系流通的交叉污染、操作人員自身都是很重要的污染源;

 

5、難去除:支原體體積小,無(wú)細(xì)胞壁,約有 1%的支原體可通過(guò)過(guò)濾器,且一般抗生素根本無(wú)法有效抑制或者去除支原體,另外,部分抗生素使用后會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生敏感效果,從而影響細(xì)胞的狀態(tài);

 

6、重視程度日益增加:學(xué)術(shù)雜志發(fā)表實(shí)驗(yàn)結(jié)果需驗(yàn)證支原體污染影響,在國(guó)際上,支原體污染檢測(cè)已經(jīng)日益成為細(xì)胞培養(yǎng)污染常規(guī)檢測(cè)之一,同時(shí)也是有效規(guī)避支原體污染的重要方法之一。

 

世界性難題?。。。?/span>Nature 収布癿文獻(xiàn)表明細(xì)胞研究領(lǐng)域中存在嚴(yán)重支原體污染問(wèn)題

Ewen Callaway. Contamination hits cell work. Nature, 29 July 2014; doi:10.1038/511518a

 

如何保護(hù)細(xì)胞細(xì)胞不受支原體的污染?

 

西美杰代理的德國(guó) PanReac Applichem 所提供 Myco 系列支原體清除產(chǎn)品可以直接整合到質(zhì)膜上破壞支原體的完整性,從而有效地清除支原體污染,而且沒(méi)有細(xì)胞毒性。另有支原體檢測(cè)與預(yù)防系列產(chǎn)品可以給細(xì)胞提供更多的安全保護(hù)。

 

 

一、AppliChem 支原體清除系列

 

對(duì)于普通細(xì)胞系,遭受污染以后可以通過(guò)重新復(fù)蘇,購(gòu)買(mǎi)等途徑更換樣本,但是對(duì)于一些較難獲得的珍貴樣本,如干細(xì)胞,原代細(xì)胞,經(jīng)過(guò)特殊處理的,或訂購(gòu)困難的細(xì)胞,一旦遭受支原體污染后,一定要馬上進(jìn)行處理。AppliChem研發(fā)的支原體清除的 Myco 系列產(chǎn)品,可以直接整合到質(zhì)膜上破壞支原體的完整性,從而有效的清除支原體污染,并可以針對(duì)不同程度,不同細(xì)胞樣本進(jìn)行針對(duì)性處理,處理過(guò)程簡(jiǎn)單,對(duì)細(xì)胞不會(huì)造成任何副作用。

名稱(chēng)

主要成分

適用樣本

使用斱法

Myco-3

(貨號(hào) A5240

環(huán)丙沙星

貼壁細(xì)胞,可清除大多數(shù)支原體污染

100 倍稀釋加入培養(yǎng)基,每 2-3 天換液,連續(xù)處理14天

Myco-1

(貨號(hào) A5222

泰妙菌素

貼壁細(xì)胞,配合能解決頑固型支原體或者使用 Myco-3 處理停用后又出現(xiàn)支原體污染的情況

100 倍稀釋加入培養(yǎng)基,與 Myco-2 配合使用。使用 Myco-1 處理 4 天后換 Myco-2 處理 3 天,如此重復(fù) 2-3 次即可

Myco-2

(貨號(hào) A5233

二甲胺四環(huán)素

 

 

二、AppliChem 細(xì)胞污染預(yù)防系列

 


有效保護(hù)細(xì)胞的最好方式是對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的預(yù)防,如工作環(huán)境定期消毒處理,嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作,保證器皿無(wú)菌等各方面。在實(shí)驗(yàn)室中,CO2 培養(yǎng)箱,CO2 培養(yǎng)箱水盤(pán),水浴鍋是非常重要的污染源。AppliChem 研發(fā)有系列污染預(yù)防系列產(chǎn)品專(zhuān)門(mén)針對(duì)這 3 大污染源,可有效預(yù)防真菌(及芽孢)、細(xì)菌、病毒等污染。使用方便,無(wú)腐蝕性,安全高效。

 

名稱(chēng)

適用環(huán)境

預(yù)防微生物

使用斱法

Incubator-Clean

(貨號(hào) A5230

CO2 培養(yǎng)箱, 工作臺(tái)等

支原體,真菌及芽孢、細(xì)菌、病毒(包拪 HIV,HBV 等)

即用型,噴霧處理完全濕潤(rùn)即可,無(wú)需轉(zhuǎn)移出細(xì)胞,建議每 2 周處理一次

Incuwater-Clean

(貨號(hào) A5219

C02 培養(yǎng)箱水盤(pán)

支原體,真菌及芽孢、細(xì)菌、病

毒(包拪 HIVHBV 等)

100 稀釋加入水盤(pán)滅菌水中,建議每 2-4 周更換滅菌水

Aquabator-Clean

(貨號(hào) A9390

水浴鍋

細(xì)菌,真菌

100 稀釋加入水浴鍋,建議每 1-2 周吐水浴鍋加入一次,每 4-6 周給水浴鍋更換一次水

 

 

三、Applichem 支原體檢測(cè)系列

 

傳統(tǒng)的支原體檢測(cè)方法包括支原體分離培養(yǎng)、支原體特異酶檢測(cè)、DNA 熒光染色檢測(cè)以及 PCR 檢測(cè),除 PCR 檢測(cè)方法以外,其他檢測(cè)方法大多耗時(shí)長(zhǎng),要求檢測(cè)人員具有豐富的經(jīng)驗(yàn),并且無(wú)法獲得足夠的靈敏度和特異性,對(duì)于一些稀有的支原體亞種無(wú)法有效檢測(cè)。

 

AppliChem 設(shè)計(jì)的支原體檢測(cè)試劑盒系列產(chǎn)品均是基于 PCR 方法,根據(jù)支原體 16S rRNA 保守序列設(shè)計(jì)引物,經(jīng)過(guò) PCR 反應(yīng)擴(kuò)增其 16S rRNA 片段,后采用瓊脂糖電泳方法檢測(cè) 270bp 條帶。相對(duì)傳統(tǒng)方法而言,具有強(qiáng)大優(yōu)勢(shì):

 

  • 高靈敏度:敏感度高達(dá) 100~1000CFU/ml,僅需  要 0.5 - 1.0 ml 細(xì)胞上清樣本即可檢測(cè);
  • 檢測(cè)品種廣泛:可檢測(cè)常規(guī)品種,同時(shí)對(duì)于稀有  亞 種 也 能 同 效 檢 測(cè) , 如 M. pneumoniae,  Acholeplasma laidlawii, M. synoviae, M. pulmonis,M.bovis,幾乎覆蓋自然界 80 余個(gè)品種;
  • 快速:操作時(shí)間只需 30 分鐘,全程 5 個(gè)小時(shí)內(nèi)  即可得到檢測(cè)結(jié)果;
  • 可靠:試劑盒中包括有陽(yáng)性對(duì)照 DNA,可保證  實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性,減小因操作帶來(lái)的誤差;
  • 安全性:無(wú)支原體培養(yǎng)過(guò)程,有效避免污染擴(kuò)大。


 


 

 

產(chǎn)品型號(hào)

檢測(cè)方法

適用儀器

試劑盒組分

PCR Mycoplasma Test Kit

貨號(hào) A3744

普通 PCR-電泳檢測(cè)

普通 PCR 儀器

Reaction Mix Buffer Solution

Positive Template Control

qPCR Mycoplasma Test Kit

貨號(hào) A9019

熒光定量 PCR

LightCycler®1.2, 1.5, 2.0, 480, Rotor-Gene? 3000, 6000, ABI Prism® 7000, iCycler iQ®, iQ?5, Opticon 2, Chromo 4, MX300P®, MX4000®.

Primer/Probe/Nucleotide Mix(RED) Rehydration Buffer(BLUE)

Positive Control DNA(GREEN) Internal Control DNA(YELLOW) PCR Grade Water(WHITE)


西美杰是PanReac Applichem 中國(guó)總代理,為用戶(hù)提供完善的技術(shù)支持與售后服務(wù)。如對(duì)產(chǎn)品感興趣歡迎撥打西美杰客服熱線400-050-4006或登錄網(wǎng)站weijielin.com了解更多信息。

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